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寻找新冠肺炎康复者血浆中的抗体，何时算是成功？

已在全球流行的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）具有传染性强、致病性强等特点。至今尚未发现特效药，也没有疫苗上市。但临床上，我国医护人员用康复患者血浆治疗新冠肺炎重型、危重型患者已取得明显效果。

康复者血浆中的抗体，就是阻击病毒的“武器”。

每次36个小时，不眠不休。

2月1日至3月2日，这样的实验，陈德喜和团队已经完成了6次。

陈德喜是首都医科大学附属北京佑安医院教授，北京市肝病研究所常务副所长。因为实验，2月1日至3月2日，他一直住在佑安医院医务人员驻地，没有回过一次家。“整个过程需要注意力高度集中，用不错眼珠形容也不为过。”陈德喜说，“实验是后续研究的基础，所以必须心无旁骛。”

不眠不休的实验，为的是在新冠肺炎康复患者血液产生的抗体中，找到一种特异性抗体。“具有高亲和力，还具有中和效应。”陈德喜说，“这种抗体将帮我们研发出中和治疗抗体和快速现场抗原检测抗体，以提高新冠肺炎检测的效率，以及病患治愈率，防止感染。”

抗体是指机体受抗原刺激由浆细胞（效应B细胞）分泌产生的针对抗原的特异免疫球蛋白。理论上，人体可以产生数十亿种抗体。“当然，不是说人自身携带着如此大量的抗体，如果一个人出生后一直生活在保温箱中，从来没有接触过任何细菌、病毒，那么就不会产生抗体。”陈德喜说。

有一部分抗体具有识别和中和外来物质如细菌、病毒，防止这些病原微生物感染的作用。而且，当机体获得针对特定微生物的抗原产生免疫功能后，就会出现针对该抗原的记忆性B细胞。“在突发感染的时候，人体会大量产生抗体。一般痊愈一段时间后抗体也会自动下降，不过当下一次再有病毒来袭，记忆性B细胞就可以重新调动产生针对该病毒的中和抗体。”陈德喜说，“打疫苗就是为了起到这一作用。”

如此特别，自然难寻。

1月20日，本市首次报告新冠肺炎确诊病例。

1月21日上午，陈德喜就召集会议，部署科研攻关，肝病研究所各平台紧急进入准备状态。

不能好好吃个年夜饭，再开始准备实验吗？毕竟当时佑安医院还没有接收新冠肺炎患者入院治疗。

“不能！”陈德喜回答得斩钉截铁。“时间紧迫，疫情可不等人，一系列前期准备工作都要完成，只觉得时间不够早，哪儿还能等。”

“设计和订制合成新冠S蛋白RBD区多肽。”

“采购RBD蛋白并进行生物素标记。”

“准备Beacon单抗B细胞捕获相关试剂。”

……

实验准备中的专业术语，陈德喜脱口而出，但说起实验的辛苦和风险，他则说得很直接——“没什么可说的。”

其实，可说的很多。

春节假期，实验室工作人员大多已经放假。实验准备，全靠陈德喜和团队自己。

由于实验要在医院内进行，而且密切接触新冠肺炎患者血液，这其中的感染风险，也许只有隔离病房内的医护人员才能够感同身受。陈德喜倒没觉得有多凶险，留在医院做实验，他觉得很平常，“是有传染风险，所以为了防疫需要，也是对更多人负责，我就把自己‘隔离’了。”陈德喜说，“我就是干这行的，做这些是理所应当的，家人也早就习惯了，都无条件地支持我。”

自我“隔离”过程中，陈德喜和家人有个约定，工作时间，不发微信，不打电话。确实，他一忙起来，根本顾不上看手机。“每天争取下班后和家里人通一次视频。”陈德喜说，“和爱人、孩子聊几句，感觉一下就放松了。”

不仅仅是陈德喜，研究所中有很多人都提前结束了春节假期，坚守岗位，随时投入抗“疫”攻关中。研究人员时红林还主动给陈德喜打电话，愿意第一个上岗。后来，她进入隔离区，加入检测新型冠状病毒的队伍。

2020年2月14日18时，因为疫情，大街上很冷清。佑安医院里也变得空空荡荡。核酸筛查室里还亮着灯，安静得可以听到呼吸声。

此时，陈德喜和团队开始了第一次实验，他很少说话，密切关注着每一个实验细节。“科学容不得一丝马虎。”

实验的过程十分枯燥。

实验只能从18时开始，因为此时，才能开始分离患者血细胞。等真正拿到“素材”需要到23时或24时。之后还需要精心计数细胞数量和计算活细胞比率，再经浓缩细胞，让其达到上仪器的标准。一般一次实验的过程是连续36个小时，中间不能有丝毫松懈。“负责仪器运转的博士庞丽君付出了极大的辛苦，每次都是从头天18时开始工作，第二天13时工作才结束。”陈德喜说。

科学是反复“试错”的研究过程。不眠不休，目不转睛，也不一定就有结果。

预实验阶段，有一次实验进行了14个小时，发现结果显示不出来。陈德喜赶紧停止实验，一步一步倒推，才最终找到错误的原因。陈德喜没时间感慨，他立即排除错误，重新开始实验，“千万不能影响下一步的实验，时间紧迫啊！”

实验过程中， Beacon（一台单细胞平台）立了大功。这种实验设备，一般大型药厂才会配备，主要是为了加速抗体药物的研发。大学实验室里并不多见，国内目前只有四五台类似设备。恰巧，北京有一台。

其实，哪里有什么“恰巧”。北京市肝病研究所的这台Beacon，是陈德喜力主，在市级财政支持下购置的。“当时购买就是认识到感染与传染性疾病走到现在，其瓶颈就是以抗体为基础的微生物诊断和治疗。”陈德喜说。

如果描述实验过程，对于普通人来说，“字都认识，但就是看不懂”。不过，实验过程中的一些数据，足以说明陈德喜和团队的精益求精，科学严谨——

“每个培养孔大约0.24纳升。1纳升等于0.000001毫升。”

“先导入分泌抗体的细胞，再导入表达ACE2(新型冠状病毒的受体)的细胞，可一次导入4个以上（考虑到病毒感染细胞的感染率问题，每个培养孔需要导入多个）。”

……

经过培养，如果表达ACE2的细胞开始“发光”，说明被感染，如果不表达，说明被中和。

到了这一步，并非终点，只是另一种开始。陈德喜和团队还要不断地筛选，“每三到五个氨基酸就会产生一个抗体，这些抗体强弱不一，有些抗体具有中和活性，有些具有诊断价值，我们要找到的就是具有高中和活性的中和抗体产生B细胞。”

截至目前，陈德喜和团队，已从佑安医院收集了20例治愈后随访的新冠肺炎患者全血，每人10毫升，进行了6次抗体筛选。然后利用Beacon筛选单个抗体分泌B细胞，经过单细胞导入、抗体分泌检测、阳性细胞导出等步骤获得阳性单克隆B细胞600余株，已建立了单个B细胞cDNA文库500个，经抗体可变区ＰＣＲ（聚合酶链式反应）后，获取100余个Ｈ链和Ｌ链同时阳性克隆。

从3月7日到13日，陈德喜和团队通过抗体小样验证，已经获取了针对新型冠状病毒刺突蛋白spike和N蛋白的特异抗体上百株，“我们建立的这个库的‘库存’足够大，有望从中找到高效诊断以及中和抗体。”陈德喜说。

“寻找”还在继续，工作还有很多——

“根据小样的抗体来源进一步利用大样进行抗体效价和亲和力实验，有望在3月下旬，获得可用于开发超敏诊断和强中和效应的治疗抗体。”

“3月底到4月份通过和在京生产厂家联合攻关，实现快速产业化，并把试剂盒和中和抗体推广。”

……

陈德喜希望时间能走得慢一点儿，而他和同事们能跑得再快一点儿，“疫情来势汹汹，科研快一分钟出结果，就有更多的患者能早一分钟确诊并得到有效救治，就有更多普通人有机会‘远离’病毒。”陈德喜说，“提高抗原诊断敏感性来发现早期感染，利用中和抗体治疗危重症患者，这是降低人群感染率和患者死亡率的关键。”

何时算是“寻找”成功？

陈德喜给出了两个标准——“获得综合抗体”“现场有效鉴别新冠肺炎和流感，让检验结果‘立等可取’”。

陈德喜的儿子今年4岁，已经一个多月没见到爸爸了。小家伙挺懂事儿。有人问起他爸爸，他会挺着小胸脯，骄傲地说：“我爸爸是去打败病毒了，他一定行！”

来源：综合环球时报、北京日报

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